酶联免疫ELISA_丁鸵墒同学生物作业《酶联免疫ELISA》提升篇_生物_丁鸵墒
编辑： admin 2017-27-06
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酶联免疫ELISA导读：
这是一道问答式的生物题型，适合平时复习训练，是丁鸵墒同学精心总结并分享给大家的生物作业题目。这道生物题涉及到的生物考点是酶联免疫ELISA，这是丁鸵墒精心归类总结的政治考点——《酶联免疫ELISA：酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》，指导老师是宫老师，涉及到的政治教科书课本知识为：酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？，主要考察酶联免疫ELISA：酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？的相关政治知识考点，用所学的相关政治知识来进行解答，下面是丁鸵墒的政治作业的问答方式进行的分享（本道题以问答模式展开）。
题目：酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？
酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
ELISA法是现代医学临床免疫诊断的重要方法,它的基本原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性,再使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性.在测定时,把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析.由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度.ELISA可用于测定各类抗原,也可用于测定抗体.比如现代检测的各类病毒、寄生虫等抗原抗体、激素、肿瘤标志物还有一些毒物药物都是通过该项技术进行测定的.在这种测定方法中有3种必要的试剂：固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和酶作用的底物.互助这道作业题的同学还参与了下面的作业题
题1： 酶联免疫反应吸附试验（ELISA）共有几种类型?各有什么特点?[生物科目]
（一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下：（1）将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物.洗涤除去其他未结合的物质.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关.（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物.根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量.根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体.（二）双位点一步法酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）.这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高.单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
在一步法测定中,应注意钩状效应（hookeffect）,类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象.当标本中待测抗原浓度相当高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量.钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果.（三）间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法.操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物.经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体.其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合,在洗涤过程中被洗去.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合,从而使该抗体间接地标记上酶.洗涤后,固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量.例如欲测人对某种疾病的抗体,可用酶标羊抗人IgG抗体.（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量.本法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体. （四）竞争法酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体.以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比.操作步骤如下：（1）将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体.洗涤.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应.如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合.如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结合量减少.参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量.洗涤. （3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多,故颜色最深.参考管颜色深度与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量.待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多.（五）捕获法测IgM抗体酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在,后者会干扰IgM抗体的测定.因此测定IgM抗本多用捕获法,先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM.操作步骤如下：（1）将抗人IgM抗体连接在固相载体上,形成固相抗人IgM.洗涤.（2）加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获.洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分.（3）加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合.洗涤.（4）加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合.洗涤.（5）加底物显色：如有颜色显示,则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在,是为阳性反应.（六）应用亲和素和生物素的ELISA酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取.分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合.现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉和素（strepavidin）.生物素（biotin）又称维生素H,分子量244.31,存在于蛋黄中.用化学方法制成的衍生物,生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide,BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物.亲和素与生物素的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定.由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置,可以连接更多的生物素化的分子,形成一种类似晶格的复合体.因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来,就可大提高ELISA的敏感度.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式,可用于间接包被,亦可用于终反应放大.可以在固相上先预包被亲和素,原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合,通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化.这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量,而且使其结合点充分暴露.另外,在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代,然后连接亲和素－酶结合物,以放大反应信号.题2： ELISA（酶联免疫标记）间接法测抗体效价,孵育一抗时为什么要设置浓度梯度?[生物科目]
设置浓度梯度,然后比较不同浓度下抗原抗体结合能力,以确定最适稀释比,一方面可以节省抗体,另一方面可以使结果更稳定.题3： 酶联免疫法（ELISA）测胰岛素的具体步骤.[生物科目]
1. 包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度（5～20μg/ml）各0.3ml加于微反应板每个凹孔 中,4℃过夜或37℃水浴2～3小时,贮存冰箱2.洗涤：移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次,每...题4： 检测艾滋的酶联免疫ELISA是第几代试剂?
目前的主流试剂基本都是第三代,其实验过程大约二小时.题5： 【【急】酶联免疫吸附剂测定ELISA的相关问题1如何洗板?文献说“手工洗板时每次加入洗涤液后,应静置15-30s,不要将一个酶标孔中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染.甩去洗涤液后将酶标】
1．我经常这么干没有遇到交叉污染的问题,就是整块板翻转,洗涤液倒入下水道以后,维持孔朝下底朝天的样子往下甩动板,跟瓶子里的最后一点水想倒出来的动作差不多．我一般觉得是往下甩,避免左右晃动比较好．不过你如果担心污染,不甩也没有关系,直接扣在吸水纸上吸干也是可以的,但是甩几下,省很多纸啊．重点是洗涤液倒干净之前不要把板翻回来正面．但是倒干净也不等于完全干掉,只要液体少到无法流淌就可以了,如果真干了的话,抗体抗原的结合可能失效．倒掉样本时候最需要小心,之后的洗涤步骤其实不容易污染．酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
2．动物脑匀浆我没有做过．提醒你跟试剂生产商确定好是否能够测这种样本．我曾经遇到过ELISA试剂对含人血清的样本发生非特异性反应的倒霉情况,问了生产商才知他们根本没有测试过人血清.如果生产商测试过动物脑匀浆的话,应该也能够告诉你恰当的稀释倍数.第二个办法是从文献中找先例,沿用别人优化过的试验方案.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
否则的话,你需要先做一个稀释试验,使用几个你确定为阳性的样本（不要第一次就用上你珍贵的实验样品）,稀释4X,10X,100X三个倍数应该够了（我做过的几个ELISA试剂对血清样本的建议倍数是4倍比较常见）,加上未稀释的你就有四个浓度梯度.关于稀释的注意事项你如果不清楚再问吧.酶联免疫ELISA：逆火学习站的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
既然如此,你就更应该跟生产商要制作匀浆的实验方法啦,跟着他们的办法做最为保险.如果是国际大公司,两个工作日之内一定会有回复,有时候网站上就能找到这种信息.酶联免疫ELISA：逆火学习站(img1.72589.com)的丁鸵墒同学的作业题：《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》解题思路
酶联免疫ELISA小结：
通过以上关于丁鸵墒同学对酶联免疫ELISA：酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？的解题复习冲刺分享，相信同学们已经对酶联免疫ELISA的相关政治作业考点会有所突破。学习政治就是要学会去理解，并仔细思考丁鸵墒同学分享的解答《酶联免疫反应(ELISA)是用来测什么的？》这道作业题的解题思路，把政治考试中可能涵盖的考点都在平时得到加强训练，才能让自己的政治科目得到提升。