【t载体】【什么是T载体？T载体分为哪几类？有什么区别？RT~】_生物_佳3_323
编辑： admin 2017-15-06
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T载体又称T-vector.聚合酶链反应产物的克隆运载体,线性化后两侧3′端各多出一个脱氧胸苷酸(T).由于PCR产物两侧3′端通常含单个脱氧腺苷酸(A),与T载体之间的A-T互补性可提高PCR产物克隆的效率.
T载体是一种克隆载体,也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体,它不能大量表达.多用于克隆PCR产物,一般用一些常见的载体改造成的,一般的DNA聚合酶没有3'-5'核酸外切酶活性,即酶的校正活性,在PCR产物3'末端以非模板依靠方式加上一个腺苷酸残基（A）,这样PCR产物的3'腺苷酸可和T-载体的3'胸腺嘧啶 互补,T-载体系统进行有效连接的基础正是这种碱基配对作用.相反,有校正活性的聚合酶将移去这个3' 突出端,产生平端PCR产物,这种产物不能直接用T-载体系统进行克隆.
假如想要一PCR扩增基因的产物大量表达,常见的方法是先将PCR产物连入T载体扩增（所用T载体需事先设计好酶切位点）,再用相应酶切下目的片段,然后连入以同样酶切处理后的表达载体大量表达蛋白质.
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题1： 【pMD19-T载体是什么】[生物科目]
pMD®19-T Vector是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体.本载体由pUC19载体改建而成,在pUC19载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点,用EcoR V进行酶切反应后,再在两侧的3’端添加“T”而成.因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3’末端添加一个“A”的特性,所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率.
由于本载体以pUC19载体为基础构建而成,所以它具有同pUC19载体相同的功能.此外,本制品中的高效连接液Solution I可以在短时间内（约30分钟）完成连接反应,其连接液可以直接用于细菌转化,大大方便了实验操作.本制品中的Control Insert（500 bp）还可以用于Control反应.
本载体与pMD®18-T Vector 相比,本制品的 β-半乳糖苷酶的表达活性更高,菌落显示蓝色的时间缩短,菌落显示的蓝色更深.因此,克隆后更容易进行克隆体的蓝白筛选.
简而言之,就是一种可以将taq酶（注意：pfu不具备在产物两端加“A”碱基的能力）扩增的两端带有A碱基的产物连入这种载体,从而通过大肠杆菌扩增的载体,而且可以通过蓝白筛选来筛选阳性克隆,插入成功的为白,不成功为蓝.图谱可以去takara上下说明书.
题2： 【请问有几种t载体?分别克隆了什么基因,酶切位点是什么?】
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题3： 【什么是T载体】[生物科目]
通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD-18T载体构建了质粒pMD-18Tman2XcmI,克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI 酶切位点;用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XcmI可以制备T载体.因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记...
题4： 【T载体是什么?】[生物科目]
一段线性双链DNA载体,载体的两端3‘末端各有一个额外的T.因为大部分Taq聚合酶会在PCR产物3’末端添加一个额外的A,所以使用T载体可以比较方便且高效（相对于平末端）进行PCR产物的连接反应,以方便克隆的构建或检测.
题5： 什么是T-载体?[生物科目]
通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD-18T载体构建了质粒pMD-18Tman2XcmI,克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI 酶切位点;用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XcmI可以制备T载体.因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记受半乳糖苷酶基因启动子的控制,甘露聚糖酶能够表达,从而水解甘露聚糖产生水解圈,指示转化了部分酶切质粒的背景菌落.此外,在甘露聚糖酶基因中存在第3个不同序列的XcmI酶切位点,因此残余的甘露聚糖酶基因引起的背景可以进一步降低.抽提大量质粒贮存,随时制备T载体使用,增加了克隆的稳定性.该T载体克服了一般T载体质量不稳定,费钱,克隆效率低,假阳性高的缺点.使用构建的T载体完成了10个基因的克隆,结果表明重组效率达到了90％～100％.