【pcr产物直接纯化】PCR产物纯化时 用的是什么纯化，扩增完直接纯，还是要..._生物_梦魇TA147
编辑： admin 2017-15-06
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那要看你的PCR产物有没有非特异性带,如果你PCR产物跑胶后很纯的只有一条带（不算引物二聚体）,那么就不需要切胶纯化,传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇－20度沉淀过夜后低速短暂离心（如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对PCR产物纯化后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.所以你最好去买PCR产物纯化试剂盒,这个方法现在只是没有试剂盒的情况下应急的.如果是PCR产物跑胶后有两条以上的带,那么你就得切胶回收目的片段,推荐这个时候还是买切胶回收试剂盒,传统法不是没有,但现在用的太少.如果有兴趣了解,欢迎追问.但无论哪种情况,纯化前后都需要跑电泳的.
互助这道作业题的同学还参与了下面的作业题
题1： 【PCR产物的纯化方式有哪几种?是用于测序的PCR产物，】
1.过柱纯化
2.乙醇/醋酸钠纯化
3.SAP-Exon I纯化
等
附上篇文献：
题2： PCR产物电泳做胶回收不也得到纯化的目的?PCR产物纯化试剂盒的好处是什么?不用让目的条带染上EB?还是更加快捷?请给出权威回答不要猜测的答案[化学科目]
PCR产物纯化试剂盒去除的是PCR反应体系中的离子、dNTP、引物以及聚合酶,收集其中的DNA片段.这只适合于几乎没有非特异性条带的PCR产物的收集.如果你的PCR产物具有非特异性条带,那么一定需要使用胶回收试剂盒.
题3： PCR产物跑胶什么条带都没有是怎么回事DNAOD值为1.88，浓度3.4ug/uL；跑胶检测条带清楚[生物科目]
做PCR时,最抑闷的一件事就是花了三个多小时,一点儿结果都没有.以前做的时候,我也遇到这增的问题!所有的反应液和底物加好了,机器设好了,跑吧,跑完PCR了,好的,再来跑电泳检测,结果,白花花一大片,什么都没有,那一刻,觉得自己好失败,别人的什么有,自己的什么都见不到,真想把机器给砸了.
后来不断的调整Taq酶的浓度,当然是增加了,有了一点儿效果,但是,还是不理想,再调整（降低）底物（DNA）的浓度,还是不行,再调整（稀释到50倍）,再做一次,有了,很是漂亮而又清晰的PCR产物的条带! 那一刻,真是太高兴了!紧接着,又做了一次,所有的样品都有PCR产物了.
总结一下,就是DNA的问题,它的浓度太高,而且在提取DNA时如果不纯,那么里的杂质就会太多,只有通过稀释DNA（同时也是稀释杂质）,才能使DNA在样品里的浓度和杂质浓度的比值无限大,在这样的条件下,只要有足够的酶,那么,反应就能正常进行,得到预期的产物.因为,如果杂交的浓度过大,酶的活性就会受到抑制.
因此,我的建议是：第一,稀释底物浓度,分两个梯度（25倍,50倍）；
第二,加大酶的浓度（1.5或2U）.
以上是在25uL反应体系下的建议
题4： PCR产物切胶纯化用365mm254mm的波长有什么区别吗?我是指在用紫外灯照射情况下.短波长对DNA的伤害最小是吗？[生物科目]
我们一般都用365nm,切胶的时间很短,一般也就在2分钟之内,基本上不用考虑紫外线对DNA的伤害.
题5： pcr已纯化是点鉴定胶吗?用几*的loadingbuffer?跑几分钟?[数学科目]
对,鉴定胶,5*,2-5ul产物,2ul buffer,多一点少一点问题不大.