怎么区别革兰氏阳性菌和阴性细菌-革兰氏阳性菌-生物学
编辑： admin 2017-01-03
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两种菌由其染色方法来区分~
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立
细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌（G+）,后者为革兰氏阴性菌（G—）.为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染.阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色.有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应.
[原理]：革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说.
1． 等电点学说,革兰氏阳性菌的等电点在PH2-3,比阴性菌（PH4-5）低,加之碘为弱氧化剂,可降低革兰氏阳性菌的等电点,致使两类菌的等电点差异扩大,因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌更强.
2．化学学说,碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合,此结合物不易被丙酮酒精脱掉,呈革兰氏染色阳性.因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐,故对碘与结晶紫结合物摄取少,且不牢固,易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性.
3．渗透学说,乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小,通透性降低,在菌体内保留了染料-碘复合物,呈紫色.阴性菌含粘肽少,细胞壁变化不大,通透性不受影响,菌体内的染料-碘复合物较易透出,失去紫色,被复染成为红色.
类似问题
类似问题1：革兰氏阳性菌和阴性菌的区别?[生物科目]
两者主要是细胞壁的结构不同.
革兰氏阳性菌的细胞壁,是一层厚而致密的肽聚糖和磷壁酸组成.肽聚糖的肽链之间通过5个甘氨酸交联着.
革兰氏阴性菌的细胞壁则是多层结构,从内到外依次是：薄薄的肽聚糖层,脂蛋白层/周质层,磷脂层和脂多糖层.革兰氏阴性菌的肽聚糖结构也和革兰氏阳性菌的有所不同,肽链是直接交联在一起的.
细胞壁结构的不同,决定了两类细菌革兰氏染色结果(阳性紫色阴性红色)和对不同类抗生素敏感性的不同.
类似问题2：革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌有什么区别革兰氏阴性菌在环境污染中有什么作用?革兰氏阳性菌又有什么作用?[生物科目]
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立
细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌（G+）,后者为革兰氏阴性菌（G—）.为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染.阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色.有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应.
[原理]：革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说.
1． 等电点学说,革兰氏阳性菌的等电点在PH2-3,比阴性菌（PH4-5）低,加之碘为弱氧化剂,可降低革兰氏阳性菌的等电点,致使两类菌的等电点差异扩大,因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌更强.
2．化学学说,碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合,此结合物不易被丙酮酒精脱掉,呈革兰氏染色阳性.因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐,故对碘与结晶紫结合物摄取少,且不牢固,易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性.
3．渗透学说,乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小,通透性降低,在菌体内保留了染料-碘复合物,呈紫色.阴性菌含粘肽少,细胞壁变化不大,通透性不受影响,菌体内的染料-碘复合物较易透出,失去紫色,被复染成为红色.
[试剂]：Crystal violet(结晶紫)、Gram Iodine(碘液)、Decolourizer（丙酮酒精）、Safranin（稀释沙黄）
[操作]：
1．标本处理：（1）.有菌部位的标本,如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片.
（2）.无菌部位的标本,如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等,应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.,取沉渣涂片染色.
2．涂片制作：菌液涂片时,用接种环沾取菌液点在载玻片上,标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时,先取生理盐水一滴,置玻片上,用接种针挑取菌落在盐水中涂布.制作的涂片应自然干燥,并经火焰固定,固定的温度不宜过高,以玻片背面接触手背不烫为准,否则可能使细菌形态改变.将固定后的涂片进行染色.
3． 染色方法：
（1）.加上Crystal violet(结晶紫)后,染色3-5秒或更久,之后用自来水冲洗之.
（2）.加上Gram Iodine(碘液)后染色3-5秒或更久,之后用自来水冲洗之.
（3）.以Decolourizer（丙酮酒精）脱色约5-10秒,并用自来水冲洗之.
（4）.加上Safranin（稀释沙黄）后,染色3-5秒或更久,之后用自来水冲洗之.
（5）.吸干或在空气中凉干后,置油镜镜检.
4．结果观察：紫色为革兰氏阳性,红色为革兰氏阴性.
[报告方式]：革兰氏染色：检出革兰氏阳性球菌 ；革兰氏阴性球菌
检出革兰氏阳性杆菌 ；革兰氏阴性杆菌
[注意事项]：
1．标本涂片不能太厚,严格按操作要求进行.
2．玻片通过火焰温度不能太高.
3．若涂片较厚,应延长脱色时间,直至不在出现紫色为止.
[临床意义]：通过革兰氏染色,将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,便于临床治疗.
[附]
1 沙黄（番红）Safranine T [C20H19ClN4=350.85]
红棕色粉末；碱基性染料.在水中溶解,在乙醇中易溶.
2 碘液配制：0.01mol/l碘液——称取1.3g碘,置于50mol烧杯中,加入2.5g碘化钾及25毫升蒸馏水,不断搅拌之,使其溶解均匀.再加0.2mol浓盐酸(体积质量1.19g/cm3),再加蒸馏水稀释到1000mol.溶液应贮藏在棕色试剂瓶中,储于低温暗橱内.有效期为一个月左右
革兰氏阴性菌,以[大肠杆菌]为代表.大肠杆菌为兼气性菌种,一般生存於肠道中及厌氧的还境中.革兰氏阴性菌细胞壁的特徵为有一层out member 与阳性菌种不同.目前对大肠杆菌的研究很多,除了它是一般食物中是否有被污染的指标外,很多分子生物学方面的研究皆需要使用到大肠杆菌当作实验宿主
类似问题3：革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的细胞壁在化学组成上有什么不同[生物科目]
革兰氏阳性菌细胞壁特殊组份 细胞壁较厚,约20～80mm.肽聚糖含量丰富,有15～50层,每层厚度1nm,约占细胞壁干重的50～80%.此外尚有大量特殊组份磷壁酸(Teichoic acid).磷壁酸是由核糖醇(Ribitol)或甘油(Glyocerol)残基经由磷酸二键互相连接而成的多聚物.磷壁酸分壁磷壁酸(Wall teichoic acid)和膜磷壁酸(Membrane teichoic acid)两种,前者和细胞壁中肽聚糖的N-乙酰胞壁酸连结,膜磷壁酸又称脂磷壁酸(Lipteichoic acid)和细胞膜连结,另一端均游离于细胞壁外.磷壁酸抗原性很强,是革兰氏阳性菌的重要表面抗原；在调节离子通过粘肽层中起作用；也可能与某些酶的活性有关；某些细菌的磷壁酸,能粘附在人类细胞表面,其作用类似菌毛,可能与致病性有关.此外,某些革兰氏阳性菌细胞壁表面还有一些特殊的表面蛋白,如A蛋白等,都与致病有关.
革兰氏阴性菌细胞壁特殊组份 细胞壁较薄,约10～15nm,有1～2层肽聚糖外,约占细胞壁干重的5～20%.结构比较复杂.尚有特殊组份外膜层位于细胞壁肽聚糖层的外侧,包括脂多糖、脂质双层、脂蛋白三部分.
脂蛋白（Lipoprotein）一端以蛋白质部分共价键连接于肽聚糖的四肽侧链上另一端以脂质部分经共价键连接于外膜的磷酸上.其功能是稳定外膜并将之固定于肽聚糖层.
脂质双层 是革兰阴性菌细胞壁的主要结构,除了转运营养物质外,还有屏障作用,能阻止多种物质透过,抵抗许多化学药物的作用,所以革兰氏阴性菌对溶菌酶、青霉素等比革兰氏阳性具有较大的抵抗力.一些化学物质如乙二胺四乙酸（EDTA）与2%十二烷基硫酸钠（SDS）或45%酚水溶液可以将外膜除去,而留下坚韧的肽聚糖层.此外,外膜蛋白质还可作为某些噬菌体和性菌毛的受体.
脂多糖（Lipopolysacchride,LPS）由脂质双层向细胞外伸出,包括类脂A、核心多糖、特异性多糖三个组成部分,习惯上将脂多糖称为细菌内毒素.
①类脂A：为一种糖磷脂,是由焦磷酸键联结的氨基葡萄糖聚二糖链,其上结合有各种长链脂肪酸.它是脂多糖的毒性部分及主要成份.为革兰氏阴性菌的致病物质.无种属特异性,各种革兰氏阴性菌内毒性引起的毒性作用都大致相同.
②核心多糖：位于类脂A的外层,由已糖、瘐糖、2-酮基—3—脱氧辛酸（KDO）、磷酸乙醇胺等组成.经KDO与类质A共价联结.核心多糖具有属特异性,同一属细菌的核心多糖相同.
③特异性多糖：在脂多糖的最外层,是由数个至数十个低聚糖（3～5单糖）重复单位所构成的多糖链.革兰氏阴性菌的菌体抗原（O抗原）就是特异多糖.各种不同的革兰氏阴性菌的特异性多糖种类及排列顺序各不相同,从而决定了细菌抗的特异性.
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构显著不同,导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面的很大差异.
类似问题4：光合细菌是革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌?
光合细菌是一种革兰氏阴性细菌,是最复杂的细菌菌群之一.
类似问题5：革兰氏阳性菌包括那些具体细菌?
葡萄球菌
链球菌
粪肠球菌
消化链球菌属
金黄色葡萄球菌
肺炎球菌
丹毒杆菌
炭疽杆菌
破伤风杆菌
螺旋体
放线菌
结核菌
革兰氏阴性菌
变形杆菌属