PCR中，-PCR-生物学习资料
编辑： admin 2017-09-03
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退火在PCR中,是指模板双链DNA经热变性、双螺旋解开成单链后,通过缓慢冷却到55℃左右,使引物（即具有互补碱基的RNA片段）与该模板DNA单链重新配对,形成新的双链分子的过程.退火能在互补的DNA或RNA之间形成双链DNA分子...
提示：
模板DNA与引 物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合
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http://zhidao.baidu.com/question/31211376.html?si=3
类似问题
类似问题1：PCR变性温度是多少?退火、延伸、复性分别是多少?
变性温度94℃,退火55℃,延伸72℃,复性37℃.
类似问题2：PCR时的退火时间长短对整个PCR 过程及结果有什么影响么?与DNA片段的长短有关系么？
退火很重要,太长会导致模板自连
太短会导致引物连接不充分
无关,长片段PCR需增加的是延伸时间
类似问题3：pcr反应哪一步要循环?还是变性、退火、延伸整个一起循环?[生物科目]
1、预变性（Initial denaturation） 模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,建议加热时间参考试剂说明书,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟.
2、循环中的变性步骤 循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可 缩短该步骤时间
变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败.
3、引物退火（Primer annealing） 退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度.然后在此次实验基础上做出预估.
退火温度对PCR的特异性有较大影响.
4、引物延伸 引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）.但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略
延伸时间随扩增片段长短而定,一般推荐在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp.
5、循环数 大多数PCR含25-40循环,过多易产生非特异扩增.
6、最后延伸 在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链.
其中第2到第4步要循环即变性、退火、延伸都要循环
类似问题4：PCR反应退火温度的高低与什么因素有关[生物科目]
退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素.引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度.引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低.虽然降低退火温度可能增加扩增产量,但引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异性扩增上升.相反,提高退火温度虽然可以提高反应的特异性,但会引起扩增效率下降,甚至无扩增产物出现.引物的退火温度可以通过Tm=4(G+C)+2(A+T)公式组略估算,一般在算出的Tm值上减去5摄氏度极为较合适反应设计退火温度.
类似问题5：做pcr,如何确定最佳退火及延伸的时间和温度?[数学科目]
延伸一般都是72° 时间是根据酶的种类和片段长度决定的
退火温度根据引物来决定 一般先用55° 不行的话再往下降