PCR仪的使用，以下的一些数据帮解释下首先是 ①94
编辑： admin 2017-04-03
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首先是 ①94℃→5min 这个目的是干嘛? DNA双链预变性,充分变成单链 ②94℃→30s 这个目的是什么? 变性,双变单 ③56℃→30s 这个目的是什么? 退火,引物结合 ④72℃→30s 这个目的又是什么? 引物沿着模板延伸 （第二步到第四步要重复30次,这个目的是什么?） 不同循环的扩增,1个 DNA双链变成2个DNA双链,以此下去进行扩增 ⑤72℃→3min 这个目的又是什么? 延伸完全,没延伸全长的延伸完全 ⑥4℃→∞ 这个目的又是什么? 保存样品而已
类似问题
类似问题1：我问下PCR仪上显示的这个是什么意思啊?[数学科目]
这些程序的意思是：
94°C 3min （预变性）94°C 30s （变性）52°C 30s （退火）72°C 30s （延伸）
GOTO 2 ,是指第一次完成到72°C之后,接下来回到第二步,30个循环.
最后72°C 1min. HOLD 10°C,是指PCR完成之后,如果你没有及时把东西拿出来,仪器会保持在10°C,是对产物的一种保护.
类似问题2：pcr仪的用途是啥子[生物科目]
polymerase chain reaction (PCR)
PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物,由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
类似问题3：PCR仪有哪些种类,如何选购?
【PCR仪的种类】
分类总是五花八门,总体来说可以分为PCR扩增仪和实时荧光PCR仪两大类,有人也把它们称为半自动和全自动,或者定性和定量,都是比较不准确的称呼.
PCR最重要的就是个升降温过程,最初的水浴锅式PCR,就是三个水浴箱,一个机械臂,定时抓出反应槽转换水浴锅.这种东东体积大,迅速慢,但其实结果并不比以后的PCR仪差,我现在都很欣赏.后来有人利用致冷和加热做成了,固定位置升降温的PCR扩增仪.
后来随着定量技术的发展,有公司将扩增仪和检测做成一体,也就成了现在所谓的全自动（或定量）PCR仪.当然标准的叫实时荧光定量PCR仪.
【品牌】
什么东西都有品牌,现在国内国外PCR仪的品牌很多,就国外而言比较著名的有：
ABI美国应用生物公司：老牌的生物公司贵族,其收购了原来的PE,而PE公司是PCR的鼻祖,旗下有很多经典的PCR仪,有5700（已停产）、7700（已停产）、7000、7900等实时荧光定量PCR仪.
ROCHE罗氏诊断：炙手可热的新贵,LIGHTCYCLER是其唯一的PCR仪,市场做得很不错,以科研定位为主,但在国内很多医院使用,其很特色离心、气加热、毛细管等,设计另类,是最有特色的PCR仪,当然好坏另议,就单其另辟蹊径的技术能力和胆识就值的佩服.
MJ：刚入中国的名流,MJ的扩增仪在生命科研领域比较出名,其产品比较适合高通量检测,人类基因组计划用得很多.其实时荧光PCR仪刚进入中国不久,孔间能使用不同温度是其特色.这点其实比较有用.
伯乐：呵,廉价的麦当劳,ICYCLER是其主打,进入中国已经比较久了,产品和5700一样,是扩增仪上加装定量模块而成,特点是价格较低.
国内现在做的也很多,比如杭州博日、杭州朗基、上海枫岭、厦门安普利等.
【选购】
准确的讲包括实时荧光定量在内都没有自动加样和标本处理系统,只能算半自动的.PCR仪是个简单的东东,一个温控设备和一个检测设备而已.
关于温控,主要是介质问题.理想的介质是导热性好、比热大、接触紧密的东东.
这方面最好的是水浴和油浴,比热大（油比水更大）、溶剂化物体,与反应物无缝接触,效果当然最好.但是自动化,小型化难,只有最初的水浴锅式使用.
硅加热,这是使用最普遍的一种,优点：易自动化、速度快、直接加热降温,效果当然好,但是第一成本较高,第二其使用的介质是金属,导热虽然好,但是与反应管,很难做到无缝接触,定性时代可以加油,但用荧光定最,由于油有荧光信号不能用.所以在无缝接触上差一些.第三由于是底部加热,下部压力较大,有溢出的可能,不过新的仪器在加热盖以后解决了这个问题.
空气加热,用空气做介质有优点,与反应体系无缝接触,但是空气的导热性差、比热小的弱点明显.因此空气加热的要利用离心来产生空气流动,增强导热性,同时使用毛细管,加大接触面积、试剂微量化来弥补.这样做了以后效果还是不错.但有的厂商把什么离心、毛细管的好处大讲特讲,对气加热的弱点闭口不谈,却是高明的市场手法.同时,使用离心,对标本量增大是有影响的并且标本量越大,空气比热小的弱点就越明显,所以空所加热的仪器标本量都比较小.使用毛细管后由于反应液与管的接触面积增大,吸附现象更大,因此试剂的通用性差一般要专门开发,成本高,虽然试剂用量少,但因为是专用试剂,每人份就是以实际量算,并不省试剂.反而增加了毛细管成本.
关于功能,所有的PCR仪功能都大体相同.只有MJ孔间能使用不同温度比较独特,这对于多项目同时检测以及循环参数的调整比较有用.但其实时荧光的仪器刚进入中国不久,具体如何还不得而知.
关于选购,根据单位情况而定,由于PCR的技术含量其实并不高,好的国产仪器如杭州博日（与日本著名厂商大和有关）也差不太多.关于进口仪器,罗氏的仪器不错,但如果标本量大,建议不要用罗氏.一则会累死的.另外,每个标本要分摊的标准曲线、对照成本太高.同时,试剂也比较受限.
类似问题4：跪求MyCycler 个人普通 PCR 仪 / 梯度 PCR仪的使用说明书
bio-rad的官方网站就有他们公司各种仪器的产品说明书和宣传海报的pdf下载.
进入后选择 China 就变成中文界面了.
在搜索栏 输Mycycler 就能搜索到说明书.
MyCycler pcr 仪是一个系列,你没有注明型号,我也没法帮你找具体是哪个pdf文件.不过,按照我说的方法,肯定能找到满足你需求的.
其实这个系列的pcr仪的操作方式非常简单,不用看说明书也能立即上手的.
类似问题5：PCR仪的最大步数是什么意思
就是最多能设置几步的意思,一般是预变性变性 变性 退火 延伸 10分钟延伸 4°保存这么6步的,有的采用的步数不一样,故有此说